Hippocampal neuronen 3 legpuzzel

Distributie van historische neuronen die EGFP uitdrukken van de Nr4a1/Nur77-promotor (Tg(Nr4a1-EGFP)GY139Gsat, www.gensat.org) in voorstad CA1 met het label "vesiculair glutamaat transporter" (VGluT1, red, Invitrogen polyclonal", 1:10 00) en met (blauwe) DAPI aan de cellagen van het show bevlekt. De expressie van EGFP werd versterkt met anti-GFP voor kippen (Abcam, 1:2000). VGluT1 geeft een label met prikkelende terminals die synapsen in de moleculaire laag van de gyrus dentate, mossy fibre terminals in CA3 en dendritische velden van de piramidale cellen in stratum orien stratum radiatum. Nr4a1-EGFP wordt sterk uitgedrukt door CA1-piramidale cellen en in mindere mate in CA3-piramidale cellen met dunne cellen in de gyrus dentate (zie de bijbehorende afbeeldingen). Sectie (40 um, sagittal) werd opgezet met Fluoromount G en met een 5X, 0.15 NA doelstelling op een Zeiss Axiovert microscoop in beeld gebracht. AF568 werd opgewekt bij 562/40 nm en de emissie werd opgevangen bij 624/40 nm met Semrockfilters en een enkele band dichroom (530-585 nm gereflecteerd, 601-800 nm verzonden). AF488 werd opgewekt bij 482/35 nm en de emissie werd opgevangen bij 536/40 nm met Semrockfilters en een enkele band dichroom (446-499 nm gereflecteerd, 513-735 nm verzonden). DAPI werd opgewekt bij 350/50 nm en de emissie werd verzameld bij 460/50 nm met een CLP400 dichroic (Chroma). De enige afbeeldingen werden gevangen voor elk kanaal gebruikend een Zeiss Axiocam MR CCD en pseudo-gekleurd gebruikend Axiovision. Lineaire achtergrondaftrekking werd gebruikt op het afbeelding in kwestie. Zie Davis en Puhl (2011), Pubmed ID 21305052, voor een gedetailleerd kleuringsprotocol en afbeeldingen van EGFP-expressie in het striatum en amygdala in deze stam. Dit afbeelding maakt deel uit van een reeks die de expressie van EGFP door de Nr4a1-promotor in de gehele hersenen karakteriseert.